一、引言

分光光度法是一種廣泛應用于化學分析的方法，它利用物質對光的吸收特性進行定性和定量分析。通過測量特定波長下的吸光度或透光度，可以確定物質的存在和濃度。本文將詳細介紹分光光度法的原理、定量方法及其應用。

二、分光光度法的原理

? ? 朗伯-比爾定律

朗伯-比爾定律是分光光度法的理論基礎，它描述了物質對光的吸收程度與溶液濃度和液層厚度的乘積成正比的關系。即吸光度A與濃度c和液層厚度b的乘積成正比，用數學公式表示為：A=εbc。其中，ε是吸光物質的摩爾吸光系數，b是液層厚度，c是溶液濃度。

? ? 吸收光譜

當一束白光通過某一有色溶液時，一些波長的光被溶液吸收，另一些波長的光則透過溶液。透射光或反射光刺激人眼使人感到顏色的存在。人把自身能感覺到的光定義為可見光。在可見光區，不同波長的光呈現不同的顏色，因此溶液的顏色由透射光的波長所決定。透射光與吸收光可組成白光，故稱這兩種光互為補色光，兩種顏色互為補色。

三、分光光度法的定量方法

? ? 標準管法

將待測溶液與已知濃度的標準溶液在相同條件下分別測定A值，然后按下式求得待測溶液中物質的含量。CT=（AT/AS）*CS

? ? 標準曲線法

先配制一系列濃度由小到大的標準溶液，分別測定出它們的A值，以A值為橫坐標，濃度為縱坐標，作標準曲線（A~c工作曲線），可以求出標準曲線的回歸方程。在測定待測溶液時，操作條件應與制作標準曲線時相同，以待測液的A值從標準曲線上查出（得到）該樣品的相應濃度。

? ? 吸光系數法

當某物質溶液的濃度為1mol/L，厚度為1cm時，溶液對某波長的吸光度稱為該物質的摩爾吸光系數，以ε表示。ε值可通過實驗測得，也可由手冊中查出。例如亞鐵氮二雜菲配合物的ε值 等于11000 L/cm·mol已知某物質ε值，只要測出其A值再根據下式便可求得樣品的濃度：c=A/ε。

四、分光光度法的應用

? ? 1.化學分析：通過測定待測物質的吸光度或透光度，可以確定其濃度或含量。這種方法廣泛應用于化學分析中，如金屬離子、有機化合物等的測定。

? ? 2.生物化學：在生物化學領域，分光光度法常用于蛋白質、核酸、酶等生物大分子的測定。通過測量特定波長下的吸光度或透光度，可以確定這些分子的濃度和性質。

? ? 3.醫學診斷：在醫學診斷中，分光光度法常用于檢測血液中的各種成分，如血紅蛋白、葡萄糖等。通過對特定波長下的吸光度或透光度的測量，可以確定這些成分的濃度和異常情況。

? ? 4.環境監測：在環境監測中，分光光度法可用于測定水體中的各種污染物含量，如重金屬離子、有機物等。通過對特定波長下的吸光度或透光度的測量，可以確定這些污染物的濃度和分布情況。

五、總結

分光光度法作為一種常用的化學分析方法，具有靈敏度高、操作簡便、快速等優點。通過測量特定波長下的吸光度或透光度，可以確定物質的存在和濃度。這種方法廣泛應用于化學分析、生物化學、醫學診斷和環境監測等領域。了解分光光度法的原理和定量方法對于正確應用該方法具有重要意義。